C18种类和官能团介绍
C18是十八烷基硅烷(Octadecylsilyl,ODS)键合相的简称,比如常规C18硅胶(L1),是通过化学反应的方式让硅胶表面的硅羟基与十八烷基二甲基氯硅烷反应,接上含有C18功能基团的功能基团。
由于C18功能基团是18个C原子的饱和脂肪链,所以在反相色谱流动相体系中具有很强的疏水性,因此疏水性样品在色谱过程中容易与C18功能基团相互作用产生色谱保留,保留强弱与其疏水性正相关,因此同类物质,疏水性越强,在反相色谱上的保留越强,越难被洗脱,体现为洗脱峰保留时间越长。
虽然我们日常用的很多填料或者色谱柱都叫C18,但是还是有很多的细分种类,而且他们是有很大的区别的,以下是几种区分方式:
在对裸硅胶进行C18功能基团键合的时候,一个C18功能基可以只连接1个硅羟基,这种形式叫单功能基C18,也可能连接2个或者3个硅羟基,这种形式叫多功能基C18,但是能同时连接3个硅羟基的概率极小。
多功能基C18由于在硅胶表面有两个或三个“锚点”,所以结合更牢固,在酸性条件下,功能基团不容易脱落,所以填料寿命更长。
另外一种形式就是串联键合C18,即是在与硅羟基结合的C18功能基团上继续接上C18,形成多个C18功能基团串联后“锚固”硅胶表面的硅羟基上。
前面说的都是常规C18,那么有常规就有非常规,与常规C18对应的是亲水C18和极性嵌合C18。亲水C18是为了改善常规C18不能耐受低比例有机相(90%到100%水相),易发生C18键合相塌陷(Matting-down effect)而发明的应用于极性较大物质反相色谱分离的C18硅胶。
AQ(aqeous)就是亲水的意思,亲水C18的功能基团与普通C18并没有区别,只不过键合密度会比常规C18低,严控C18键合相在硅胶表面上的距离,使之不易多基团相互聚拢,而且经过了特殊的(极性基团)封端处理。
Polar代表极性嵌合的意思,极性嵌合C18硅胶与常规C18和亲水C18本质上不同的是采用了内部带有极性基团的C18功能基团,这就等于在疏水的C18侧链功能基内部“嵌合”上一个亲水部分,这样不仅仅可以避免高比例水相流动相中发生键合相“塌陷”现象,而且极性嵌合基团还能降低极性样品组分,尤其是生物碱类物质与硅羟基的相互作用,极大地改善他们的洗脱峰形。另外,极性嵌合C18还能提供特殊的分离选择性。
我们一般看到的C18色谱填料一般是全多孔硅胶,其他的还有C18键合的核壳型硅胶,也有无孔和贯流孔的C18。
这几者的不同之处在于比表面积大小和传质路径长短,全多孔比表面积最大,饱和结合载量最高,但是传质作用受粒径影响明显。
从全多孔到核壳结构再到无孔结构,比表面积逐渐降低,但是传质作用一直在优化。贯流孔因其贯流大孔的存在,在比表面积没有被剧烈降低的情况下,极大优化了传质作用,达到传质作用与载量的平衡。
我们通常所说的C18色谱填料,一般是指C18硅胶色谱填料,但是C18可不仅仅能做硅胶色谱填料,也能做聚合物色谱填料呢!
众所周知,诸如聚苯乙烯(PS-DVB)基架材质的色谱填料,虽然常规使用的寿命长、且能体现C18硅胶类似的反相保留性质,但是其保留往往比C18硅胶弱很多,要想达到C18硅胶类似的保留强度基本不太现实。
但是色谱保留强度是色谱分离的基础,保留强度足够了,才能有更多的洗脱强度差异来寻找选择性差异的操作区间,所以很多时候光凭聚苯乙烯基架的反相聚合物色谱填料是不够的。
于是就有人在聚合物材料上键合C18功能基团,这种色谱填料技能有单纯聚合物反相填料的长常规使用的寿命,又可以展现与C18硅胶极其相似的保留能力和选择性,不过这类填料市面上极少。
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